土壤過氧化物酶(S-POD)活性檢測試劑盒(分光光度法)

　　中文名稱:土壤過氧化物酶(S-POD)活性檢測試劑盒

　　儲存條件:2-8℃

　　單位:盒

　　有效期:6個月

　　英文名稱:Soil Peroxidase(S-POD)Activity Assay Kit

　　檢測方法:可見分光光度法 Spectrophotometer

　　規格:50T/24S

　　測定意義：S-POD 主要來源于土壤微生物，能夠氧化土壤有機物質產生過氧化物，在腐殖質的形成過程中具有重要作用。

　　測定原理：S-POD 催化有機物質氧化成醌，后者在430nm 有特征光吸收。

　　自備用品：可見分光光度計、臺式離心機、水浴鍋、可調式移液器、1mL 玻璃比色皿、ym100mL(不允許快遞)、研缽、冰和蒸餾水。

　　備注：

　　以上數據均來自公開文獻,暫未進行獨立驗證, 僅供參考。

　　產品組成：使用前請認真核對試劑體積與瓶內體積是否一致，有疑問請及時聯系索萊寶工作人員。

　　試劑名稱 規格 保存條件

　　試劑一 粉劑×2 瓶 2-8°C保存

　　試劑二 液體 5 mL×1 瓶 2-8°C保存

　　試劑三 液體 10 mL×1 瓶 2-8°C保存

　　試劑四 液體 100 mL×1 瓶(自備) 2-8°C保存

　　標準品 液體 10 mL×1 瓶 2-8°C保存

　　溶液的配制：

　　1、 試劑一：臨用前加入 10 mL 蒸餾水，用不完的試劑 2-8°C保存一周;

　　2、 試劑四：自備ym;

　　3、 標準品：相當于每 1mL ym相中含有 0.2mg/mL 紫色沒食子素。

　　產品說明：

　　S-POD主要來源于土壤微生物，能夠氧化土壤有機物質產生過氧化物，在腐殖質的形成過程中具有重要作用。

　　S-POD催化有機物質氧化成醌，后者在430nm有特征光吸收。

　　Soil organic matter Quinone (430nm)

　　注意：實驗之前建議選擇 2-3 個預期差異大的樣本做預實驗。如果樣本吸光值不在測量范圍內建議稀釋或者增加樣本量進行檢測。

　　需自備的儀器和用品：

　　可見分光光度計、臺式離心機、水浴鍋/恒溫培養箱、可調式移液器、0.5mol/L HCl溶液、1mL玻璃比色皿、30-50目篩、ym不允許快遞)、研缽、冰和蒸餾水。

　　操作步驟：

　　一、樣本處理(可適當調整待測樣本量，具體比例可以參考文獻)

　　新鮮土樣自然風干或 37°C烘箱風干，過 30-50 目篩。

　　二、測定步驟

　　1、 標準品處理：將標準品用0.5mol/L HCl溶液稀釋至0.1、0.08、0.06、0.04、0.02、0.01、0mg/mL，可參考下表。

　　序號 稀釋前濃度(mg/mL) 標準液體積(μL) 0.5 mol/L HCl 體積(μL) 稀釋后濃度(mg/mL)

　　1 0.2 500 500 0.1

　　2 0.2 400 600 0.08

　　3 0.2 300 700 0.06

　　4 0.2 200 800 0.04

　　5 0.2 100 900 0.02

　　6 0.2 50 950 0.01

　　7 - - 1000 0

　　備注：試驗中每個標準管需 1000μL 標準溶液。

　　2、 標曲測定：分光光度計預熱30min以上，調節波長至430nm，0mg/mL管調零，直接測定稀釋后各標準管的吸光度，記為A標準。

　　3、 樣本測定：

　　試劑名稱 測定管 對照管

　　風干土樣(g) 0.05 0.05

　　蒸餾水 - 100

　　試劑一(μL) 400 400

　　試劑二(μL) 100 -

　　震蕩混勻，置于30°C水浴鍋準確反應1 h

　　試劑三(μL) 200 200

　　試劑四(μL) 1750 1750

　　振蕩數次，室溫靜置30min，用試劑四調零，取1mL上層液于430nm處測定吸光值A，記為A測定管、A對照管。

　　計算ΔA測定=A測定管-A對照管。每個測定管需設一個對照管。

　　三、S-POD 活力計算

　　1、標準曲線的建立

　　根據標準管的濃度(y，mg/mL)和吸光度A標準(x，A標準)，建立標準曲線。根據標準曲線，將ΔA測定(x)帶入公式計算測定中樣本的濃度y值(mg/mL)。

　　2、S-POD活力計算

　　單位的定義：每天每g土樣中產生1mg紫色沒食子素定義為一個酶活力單位。

　　S-POD活力(U/g 土樣)=y×V提取相÷W÷T=840×y

　　T：反應時間，1h=1/24d;V提取相：提取相總體積，1.75mL;W：樣本質量，0.05g。

　　注意事項：

　　每個樣本均需做對照管。

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